微生物限度測試是藥品、醫療器械及一次性衛生用品質量控制的關鍵環節，通過薄膜過濾法、傾注培養法等技術定量或定性檢測樣品中的微生物污染水平。其操作流程與技術要點如下：

一、測試依據標準

?藥品/醫療器械?

依據《中華人民共和國藥典》2020年版四部，重點檢測需氧菌總數、霉菌/酵母菌總數及控制菌（如大腸埃希菌）?。

?一次性衛生用品?

執行GB 15979-2002《一次性衛生用品衛生標準》附錄B，控制菌選擇依據產品用途調整?68。

二、核心操作流程（薄膜過濾法）

?1. 前期準備?

?環境消毒?：開啟潔凈室紫外燈或臭氧發生器≥30分鐘，沉降菌檢測達標（如TSA平板菌落≤1 CFU/皿）?。

?器具滅菌?：濾杯、鑷子、稀釋液等經121℃高壓滅菌15-20分鐘?。

?樣品處理?：固體樣品需均質（如10g試樣+200ml滅菌生理鹽水拍打混勻）?。

?2. 過濾操作流程?

?步驟? ?操作要點?

?濾杯滅菌? 火焰噴槍灼燒濾杯接觸面，防止交叉污染?。

?濾膜放置? 無菌鑷子取孔徑≤0.45μm濾膜，平整貼附于底座?。

?樣品加載? 傾注50-100ml試樣（純化水）或1-10ml濃縮液?。

?真空抽濾? 開啟儀器，調節流速緩慢過濾，避免濾膜破損?。

?濾膜轉移? 過濾結束關閉電源，鑷子夾取濾膜貼于培養基表面（如R2A瓊脂）。

?3. 培養與計數?

?細菌總數?：營養瓊脂培養基，30-35℃培養48-72小時?。

?霉菌/酵母菌?：玫瑰紅鈉瓊脂或沙氏瓊脂，20-25℃培養5-7天?。

?質控要求?：平行樣菌落數差異≤2倍，細菌回收率≥70%?